Apa Metode Mengukur Pertumbuhan Mikroba?

Metode Pengukuran Pertumbuhan Mikroba :

Ada berbagai metode untuk menghitung pertumbuhan mikroba. Ini didasarkan pada parameter sel yang berbeda seperti pengukuran berat kering dan berat basah, absorbansi, pelat sel, kepadatan, kekeruhan, pengukuran ATP, jumlah yang layak, aktivitas ATPase dan penggunaan penghitung Coulter.

(sebuah) Pengukuran Berat Basah:

Pengukuran massa sel merupakan langkah mudah dalam pengukuran pertumbuhan sel. Volume sampel kultur yang diketahui dari fermentasi atau ditarik dan disentrifugasi, Berat basah pelet diukur dengan menggunakan kertas saring yang telah ditimbang sebelumnya. Kertas saring yang telah ditimbang sebelumnya dengan ukuran yang sama digunakan untuk mengurangi berat kertas saring basah. Jadi berat basah sel dihitung.

(b) Pengukuran Berat Kering:

Pengukuran berat kering bahan sel mirip dengan pengukuran berat basah. Di sini berat kering kertas saring yang ditimbang sebelumnya yang mengandung pelet sel mikroba diukur. Berat kering kertas saring dihilangkan dengan mengurangi berat kering hanya kertas saring dengan ukuran yang sama.

Dengan demikian berat kering sel mikroba dapat diperoleh. Misalnya berat kering sekitar satu juta sel E. coli sama dengan 150 mg. Berat kering sel bakteri biasanya 10-20% dari berat basah.

(c) Daya serap:

Absorbansi diukur dengan menggunakan spektrofotometer. Hamburan cahaya meningkat dengan bertambahnya jumlah sel. Ketika cahaya dilewatkan melalui suspensi sel bakteri, cahaya dihamburkan oleh sel.

Oleh karena itu, transmisi cahaya menurun. Pada panjang gelombang tertentu absorbansi cahaya sebanding dengan konsentrasi sel bakteri yang ada dalam suspensi.

Dengan demikian pertumbuhan sel dari setiap suspensi bakteri pada panjang gelombang tertentu pada interval yang berbeda dapat diukur dalam hal absorbansi dan grafik standar (antara absorbansi dan konsentrasi sel) dapat disiapkan.

(d) Jumlah Sel Total:

Pertumbuhan sel juga diukur dengan menghitung jumlah sel total mikroba yang ada dalam sampel tersebut. Jumlah sel (hidup dan mati) sampel cair dihitung dengan menggunakan slide kaca mikroskop khusus yang disebut Petroff-Hausser Counting Chamber.

Di ruang ini, kisi-kisi ditandai pada permukaan slide kaca dengan kotak area yang diketahui. Seluruh kisi memiliki 25 kotak besar, luas total 1 mm 2 dan volume total 0,02 mm 3 (1/50 mm).

Semua sel dihitung dalam kotak besar dan jumlah total per ml sampel diukur. Jika 1 kotak berisi 12 sel, jumlah total sel per ml sampel adalah: 12 sel x 25 kotak x 50×10 3 = 1,5×0 7 sel.

Jika terdapat biakan encer, dapat dilakukan penghitungan sel secara langsung. Namun, kultur sel dengan kepadatan tinggi dapat diencerkan. Jika tidak, gumpalan sel akan terbentuk yang akan menimbulkan masalah dalam penghitungan sel bakteri secara tepat.

(e) Hitungan yang Layak:

Sel yang hidup didefinisikan sebagai sel yang mampu membelah dan menambah jumlah sel. Cara normal untuk melakukan penghitungan yang layak adalah menentukan jumlah sel dalam sampel yang mampu membentuk koloni pada media yang sesuai.

Di sini diasumsikan bahwa setiap sel yang hidup akan membentuk satu koloni. Oleh karena itu, perhitungan yang layak sering disebut jumlah lempeng atau jumlah koloni. Ada dua cara untuk membentuk jumlah pelat.

(saya) Metode Hitungan Penyebaran:

Volume biakan (0,1 ml) disebarkan di atas permukaan pelat agar dengan menggunakan penyebar kaca steril. Piring diinkubasi untuk mengembangkan koloni. Kemudian jumlah koloni dihitung (Gambar 6.6A).

(ii) Metode Tuang Piring:

Dalam metode ini volume yang diketahui (0,1-1,0 ml) dari biakan dituangkan ke dalam cawan Petri steril. Kemudian media agar cair dituangkan dan dicampur dengan lembut. Piring diinkubasi. Koloni yang tumbuh di permukaan agar dihitung.

(f) Penghitung Coulter:

Ini adalah perangkat elektronik. Kultur mikroba langsung digunakan untuk menghitung sel yang ada dalam suspensi.

Related Posts